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中檢維康iELisaT-2毒素檢測(cè)試劑盒

簡(jiǎn)要描述:中檢維康iELisaT-2毒素檢測(cè)試劑盒
測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)。微孔板上包被有偶聯(lián)抗原。分別加入T2毒素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、酶標(biāo)記物和抗體于微孔中,樣品/標(biāo)準(zhǔn)品競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體,酶標(biāo)記物可與一抗結(jié)合,再于酶標(biāo)版上的包被抗原結(jié)合。反應(yīng)洗滌后,加入TMB底物顯藍(lán)色,加入終止液后顏色由藍(lán)變黃,用酶標(biāo)儀在450nm處檢測(cè),吸光值與樣品中T2毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出T2毒素的含量。

  • 產(chǎn)品型號(hào):CE107,96T
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-04-23
  • 訪  問(wèn)  量:1301

詳細(xì)介紹

品牌clover/科樂(lè)福產(chǎn)地類別進(jìn)口
應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

 中檢維康iELisaT-2毒素檢測(cè)試劑盒

  1. 概要

T2毒素(T2)是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素。主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品,對(duì)人類健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。T-2毒素主要影響血液,肝臟,腎臟,胰腺肌肉及淋巴細(xì)胞的功能,T-2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長(zhǎng)停滯、繁殖和神經(jīng)機(jī)能障礙等。使用T2毒素試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中T2毒素殘留。

  1. 原理

測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)。微孔板上包被有偶聯(lián)抗原。分別加入T2毒素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、酶標(biāo)記物和抗體于微孔中,樣品/標(biāo)準(zhǔn)品競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體,酶標(biāo)記物可與一抗結(jié)合,再于酶標(biāo)版上的包被抗原結(jié)合。反應(yīng)洗滌后,加入TMB底物顯藍(lán)色,加入終止液后顏色由藍(lán)變黃,用酶標(biāo)儀在450nm處檢測(cè),吸光值與樣品中T2毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出T2毒素的含量。

  1. 試劑盒的組成
  1. 包被有抗原的96微孔板:1塊(96 孔,12×8 孔)
  2. T2毒素標(biāo)準(zhǔn)品:0ng/mL、0.5ng/mL、 1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、20ng/mL                        1 × 1.0mL
  3. T2抗體                      1 ×10mL
  4. 酶標(biāo)記物                    1 ×10mL
  5. 10× 濃縮洗滌液:            1 × 50mL
  6. T2稀釋緩沖液A             1 × 50mL
  7. T2稀釋緩沖液B             1 × 50mL
  8. 顯色底物TMB              1 × 17mL
  9. 終止液:                     1 × 7mL
  10. 試劑盒說(shuō)明書:               1
  11. 質(zhì)檢報(bào)告:                   1
  1. 需要的儀器、試劑

1)儀器   

  1. 酶標(biāo)儀450nmiELisa全自動(dòng)酶標(biāo)儀或相當(dāng)者)
  2. 微量移液器:20μL-200μL單道,100μL-1000μL單道, 50μL-300μL八道
  3. 多功能旋轉(zhuǎn)混合器(或者搖床、高速均質(zhì)器)
  4. 酶標(biāo)板振蕩器
  5. 渦旋混合器
  6. 50mL離心管
  7. 1.5mL離心管
  8. 定性濾紙
  9. 過(guò)濾漏斗
  10. 天平:感量0.01g
  1. 試劑
  1. 樣品提取液70%甲醇:取700mL甲醇,加300mL純水,混勻。
  1. 樣品處理

5.1谷物(玉米、小麥、高粱、大米、大豆):

  1. 稱取5.0g粉碎樣品于50mL離心管中,加入25.0mL樣品提取液70%甲醇,置于多功能旋轉(zhuǎn)混合器上振蕩30分鐘(或使用高速均質(zhì)器均質(zhì)3分鐘,或搖床上振蕩40分鐘)。
  2. 將提取液用普通濾紙過(guò)濾,吸取100μL濾液置于1.5mL離心管中,加入900μL T2稀釋緩沖液A,用渦旋混合器混勻。

稀釋倍數(shù):50

5.2飼料:

  1. 稱取5.0g粉碎樣品于50mL離心管中,加入25.0mL樣品提取液70%甲醇,置于多功能旋轉(zhuǎn)混合器上振蕩30分鐘(或使用高速均質(zhì)器均質(zhì)3分鐘,或搖床上振蕩40分鐘)。
  2. 將提取液用普通濾紙過(guò)濾,用0.22μm有機(jī)系濾膜過(guò)濾后,100μL濾液置于1.5mL離心管中,加入900uL T2稀釋緩沖液B,用渦旋混合器混勻。

稀釋倍數(shù):50

6 酶聯(lián)免疫分析程序

6.1測(cè)定之前注意事項(xiàng)

  1. 使用前將所有試劑平衡至室溫(20-25。
  2. 使用后迅速將試劑放入2-8冷藏。
  3. ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
  4. 所有溫育過(guò)程應(yīng)避免陽(yáng)光直射,并按要求用蓋板覆蓋住酶標(biāo)板。

6.2溶液的配制

  1. 提取液的配制: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需的量配制70%的甲醇水溶液(水要用純水、或蒸餾水、去離子水)
  2. 洗滌液的配制:將濃縮洗滌液用純水稀釋10倍后使用。(例如:取10 mL 濃縮液+90 mL純水, 可以用于32孔的檢測(cè))。

6.3測(cè)定程序

  1. 將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品所用數(shù)量的孔條插入酶標(biāo)板架,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn),記錄下標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。未使用的酶標(biāo)板用鋁箔袋封好置2-8冷藏保存。
  2. 分別吸取50μL標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加至相應(yīng)的微孔(雙孔)中,然后再各加入50μL的酶標(biāo)記物,后加入50μLT2抗體,裝入袋中密封,室溫(25℃)溫育20分鐘。
  3. 倒出孔中的液體,每孔加入250μL稀釋好的洗滌液洗滌,重復(fù)操作四次。洗板時(shí)每次間隔30s,洗完后用力在吸水紙上排干。
  4. 每孔加入100μL顯色底物,避光室溫(25℃)溫育10分鐘。
  5. 每孔加入50μL終止液,混勻。
  6. 置于酶標(biāo)儀中,振蕩混勻,在450nm處測(cè)定吸光度值(OD值),參比波長(zhǎng)630nm。(iELisa全自動(dòng)酶標(biāo)儀可以直接讀出、打印濃度值)。

7.  結(jié)果判定

1)所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以DI個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B<蘇b>0)再乘以100%,即百分吸光度值。

 

百分吸光度值(%)=

B

×100%

B<蘇b>0

T2毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度值(ppb)為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。也可以用回歸方程法,計(jì)算出樣本溶液濃度。利用計(jì)算機(jī)專業(yè)軟件,更便于大量樣品的快速分析。

  1. 樣品的實(shí)際濃度為讀數(shù)結(jié)果乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
  2. 如果測(cè)定值超出檢測(cè)范圍,樣品提取溶液按一定的比例用70%甲醇進(jìn)行稀釋。

8.  注意事項(xiàng)

  1. 室溫低于20或試劑及樣品未回到室溫(20- 25)會(huì)導(dǎo)致數(shù)值偏低。
  2. 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥過(guò)久的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板排干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
  3. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對(duì)光敏感,避免直接暴露在光線下。
  4. 混合要均勻,洗板要*(包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn)液的時(shí)候都必需充分混合均勻)。
  5. 終止液為強(qiáng)酸性物質(zhì),避免接觸皮膚。
  6. 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,也不要混合使用不同批次的試劑盒,這樣會(huì)引起測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。
  7. 試劑盒的儲(chǔ)存條件是2-8,切勿冷凍。

9.  中檢維康iELisaT-2毒素檢測(cè)試劑盒的性能指標(biāo)

  1. 檢測(cè)限LOD: 谷物10ppb(μg/kg),飼料15ppb,(LOD:空白樣品測(cè)定值+2倍標(biāo)準(zhǔn)偏差SD
  2. 定量限LOQ: 谷物25ppb,飼料30ppb。
  3. 定量檢測(cè)范圍:谷物25-1000ppb,飼料30-1000ppb。

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